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西安瑞禧生物科技有限公司是西北一家專業(yè)從事進(jìn)口藥用磷脂類產(chǎn)品及其相關(guān)產(chǎn)品銷售為主的一家公司，公司目前經(jīng)營的產(chǎn)品有進(jìn)口合成磷脂，PEG修飾磷脂，聚乙二醇衍生產(chǎn)品，鞘氨醇，神經(jīng)酰胺，鞘磷脂等產(chǎn)品。

小膠質(zhì)細(xì)胞是大腦的免疫細(xì)胞，是在胚胎發(fā)育初期由外周血中的巨噬細(xì)胞遷移進(jìn)入腦組織，在腦組織中分化形成的。作為腦內(nèi)的免疫細(xì)胞，其表面有很多受體表達(dá)，可以結(jié)合多種類型的分子結(jié)構(gòu)。　　

針對腫瘤細(xì)胞表皮生長因子（EGFR）篩選出含有6個氨基酸的多肽配體。將含D4多肽修飾的熒光脂質(zhì)體通過尾靜脈注射到荷瘤小鼠體內(nèi)，小動物活體成像發(fā)現(xiàn)熒光多肽脂質(zhì)體不僅在腫瘤內(nèi)有聚集，在腦內(nèi)也有較強(qiáng)的熒光信號。

此外，有實驗，用洛哌丁胺分子作為“探針”，DSPE-PEG2000-D4形成的膠束為載體，通過小鼠熱水溫浴縮尾和福爾馬林致痛等藥效學(xué)實驗，發(fā)現(xiàn)D4多肽具有靶向載藥膠束跨越血腦屏障的能力。　　

基于上述結(jié)果及小膠質(zhì)細(xì)胞在血腦屏障中的結(jié)構(gòu)和功能特性，進(jìn)行D4多肽修飾的靶向熒光脂質(zhì)體在腦內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞的作用研究，操作如下：

一、 以EPC/HSPC,Chol和DSPE-PEG2000，FITC-DHPE/Dii為材料，制備不同處方的空白熒光脂質(zhì)體和D4多肽修飾的靶向熒光脂質(zhì)體，利用差速震蕩法在大鼠乳鼠中分離得到原代小膠質(zhì)細(xì)胞，與熒光脂質(zhì)體共同孵育后，用流式細(xì)胞儀和共聚焦顯微鏡觀察空白與靶向熒光脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞的體外結(jié)合情況。

結(jié)果：HSPC脂質(zhì)體在含有2％D4多肽時與小膠質(zhì)細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞都有較好的結(jié)合；熒光共聚焦顯微鏡觀察顯示，靶向脂質(zhì)體的結(jié)合明顯優(yōu)于非靶向脂質(zhì)體，且靶向脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞在0.5 h時就有很好的結(jié)合，與星型膠質(zhì)細(xì)胞在4h時有較好的結(jié)合，而與少突膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)合不明顯。

二、 D4脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)的結(jié)合，尾靜脈注射3h后，利用磁珠分選方法分離出大腦中的小膠質(zhì)細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測熒光脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞在體內(nèi)的結(jié)合強(qiáng)弱。

結(jié)果：D4多肽修飾的脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)合與空白脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)合有顯著性差異。

三、 為進(jìn)一步觀察熒光脂質(zhì)體在腦組織中的分布，用免疫組化的方法，尾靜脈注射熒光脂質(zhì)體后2 h,4 h和10 h取出完整腦組織，冰凍切片，CD68標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞，DAPI染細(xì)胞核后，共聚焦顯微鏡下觀察。

結(jié)果：4 h時D4多肽脂質(zhì)體開始靠近小膠質(zhì)細(xì)胞，10 h時，D4多肽修飾的熒光脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞完全結(jié)合，而非靶向脂質(zhì)體與小膠質(zhì)細(xì)胞沒有結(jié)合。　

最后，還可利用主動載藥方法制備阿霉素脂質(zhì)體，腦部原位注射種植黑色素瘤細(xì)胞7天后，尾靜脈給藥，每3天一次，連續(xù)兩周，用PET技術(shù)比較非靶向與靶向組腦腫瘤大小。

結(jié)果：靶向組小鼠與非靶向組小鼠的腫瘤大小都比沒給藥組小，但是靶向組與非靶向組沒有顯著性差異。可能的原因是腫瘤組織中的血腦屏障被破壞，或者脂質(zhì)體的毒性也作用于小膠質(zhì)細(xì)胞而導(dǎo)致不能有效地免疫應(yīng)答。

關(guān)鍵詞定制:

D4多肽修飾的熒光脂質(zhì)體

DSPE-PEG2000-D4

DSPE-PEG2000

DSPE-PEG2000-FITC

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